服務(wù)介紹

Polysome profiling 實驗，是利用核糖體沉降系數(shù)較大的特性，用蔗糖密度梯度離心的方法分離多聚核糖體。由于核糖體是細胞里密度最高的生物大分子，一條 mRNA 上結(jié)合的核糖體越多，在蔗糖密度梯度離心時的沉降速率越快，因此結(jié)合不同數(shù)量核糖體的mRNA 通過離心在溶液中會被分開。離心結(jié)束后將蔗糖溶液由底部緩慢抽出，即可對結(jié)合有不同數(shù)量核糖體的組分進行分離，可以直觀地反映細胞內(nèi)翻譯的狀態(tài)。

實驗流程方法

Polysome profiling 是一種翻譯組學(xué)的研究方法，其操作流程為先用放線菌酮或氯霉素處理樣本，然后裂解細胞，離心并取上清液，之后將上清液轉(zhuǎn)移至蔗糖梯度上進行超離。最后，進行核糖體檢測及分離。研究人員可根據(jù)實驗需要，繼續(xù)做 PCR 定量分析、蛋白質(zhì)提取等實驗。

Polysome profiling實驗流程概要（source：Su D, et al., 2024）

技術(shù)應(yīng)用

① 準確檢測蛋白翻譯效率；

② 分析目標RNA降解、翻譯起始和抑制等機制，研究翻譯調(diào)控與基因表達；

③ 挖掘潛在翻譯的非常規(guī)RNA，如lncRNA、circRNA的翻譯。

技術(shù)優(yōu)勢

① 直觀反映翻譯狀態(tài)：Polysome profiling技術(shù)能夠直觀地反映細胞和組織內(nèi)的翻譯狀態(tài)，通過分析不同組分中mRNA的分布，可以了解特定mRNA的翻譯活躍程度；

② 有助于理解翻譯動態(tài)變化：Polysome profiling能夠檢測翻譯中發(fā)生巨大變化的RNA，結(jié)合測序技術(shù)，有助于理解在不同生理或病理狀態(tài)下翻譯動態(tài)的變化。

升級版Polysome profiling plus服務(wù)內(nèi)容

①增加組分：基礎(chǔ)版Polysome profiling可根據(jù)沉降系數(shù)大小，把核糖體-RNA復(fù)合物分離成5個組分，而升級版Polysome profiling提供共18個分離的組分，可增加RT-qPCR數(shù)據(jù)點，繪制更詳細的翻譯動態(tài)折線圖，更精準反映翻譯活性的動態(tài)變化；

②增加RNA質(zhì)控：檢測RNA完整性，確保下游的分析。如送樣不均衡，可根據(jù)質(zhì)檢結(jié)果進行相對等量上機(但不一定準，因為復(fù)合物含核酸和核糖體、蛋白等)

③能處理的樣本類型增多：包括細胞、組織、細菌、真菌菌體等。

④統(tǒng)計AUC值：P/non-P ratio常用于表征樣品整體的翻譯活性

吉賽翻譯組技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

                                                                   Polysome Profiling圖譜示例

升級版Polysome profiling提供AUC值統(tǒng)計（P/non-P ratio），常用于表征樣品整體的翻譯活性

例：

Polysome profiling原始樣本送樣建議

*具體處理、保存和運輸方法請咨詢技術(shù)支持。

物種范圍：請咨詢銷售或技術(shù)支持